Residual PS80 Analysis

Method 1.

• Column 정보: Waters Symmetry C18, 150 x 3.9 mm, 5 μm
• 이동상 (Mobile phase) 조제:

1. Potassium phosphate monobasic 2.76 g을 1000 mL beaker에 넣고 물 1000 mL을 넣어 녹인다.
2. 위의 기재된 버퍼와 Acetonitrile의 비율을 Buffer : Acetonitrile = 2 : 8의 비율로 2 L glass bottle에 혼합한 후 Phosphoric acid로 pH 2.8 ± 0.03으로 맞춘다.

• 희석 버퍼 (Dilution buffer): 물을 사용한다.
  
  
• 1 M Potassium hydroxide 조제:
  Potassium hydroxide 5.61 g을 100 mL volumetric flask에 넣고 물 100 mL에 녹인다.

• Standard 조제

1. PS80 1.0 g을 100 mL Volumetric flask에 넣고 희석 버퍼를 사용하여 100 mL이 되도록 한다. (희석 후: 10000 ppm) Magnetic bar를 넣고 혼합하여 PS80이 완전히 용해되도록 한다.
2. 위에서 기술한 10000 ppm의 PS80 standard 10 mL을 100 mL volumetric flask에 희석 버퍼를 넣어 100 mL이 되도록 한다. (희석 후: 1000 ppm)
3. 15 mL FALCON tube에 다음의 표와 같이 희석하여 50 ~ 1000 ppm 표준액을 조제한다.

• 검액의 조제
  시료 200 μL와 희석 버퍼 (DW) 600 μL를 1:3의 비율로 Micro tube에 혼합한 후 vortexing 하여 섞는다.
  
  
• 시험 절차

1. 희석 버퍼 (DW)를 Blank로 한다.
2. 희석한 시료 500 μL와 각 농도의 표준액 500 μL를 각각 에탄올 500 μL와 함께 Microtube에 넣고 혼합한다. Vortex mixer를 사용하여 적절하게 섞고 13000 rpm, 10 min 조건으로 원심 분리한다.
3. 분리된 상층액 450 μL와 1M Potassium hydroxide 50 μL을 Microtube에 넣고 혼합 후 약 40 ℃의 Water bath에서 약 6시간 (± 2 시간) 동안 반응시킨다.
4. 반응시킨 뒤 0 ~ 30 ℃ 의 조건에서 Vortex mixer와 micropipette을 사용하여 시료를 완전히 섞어준 후 vial insert를 사용하여 HPLC vial에 넣어준다.

• 분석 조건

Category	Condition
Wavelength	210 nm
Column Temp.	30 ℃
Sampler Temp.	2 ~ 8 ℃
Injection volume	30 μL
Flow rate	1.0 mL/min
Isocratic time	25 min